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      小鼠elisa試劑盒

      小鼠核轉錄因子(NF-KB)ELISA試劑盒

      文字:[大][中][小] 手機頁面二維碼 2019/11/6     瀏覽次數:    

      小鼠核轉錄因子(NF-KB)ELISA試劑盒

      本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中小鼠核轉錄因子(NF-KB)的含量

      小鼠核轉錄因子(NF-KB)ELISA試劑盒

      本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中小鼠核轉錄因子(NF-KB)的含量


      有效期:6個月

      保存條件:2-8℃

      本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診斷

       

      實驗原理

      試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠核轉錄因子(NF-KB)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠核轉錄因子(NF-KB)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

       

      樣本處理及要求

      1.  血清將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      2.  血漿用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

      4.  細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

      注:標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

       

      需要而未提供的試劑和器材

      1.  酶標儀(450nm)

      2.  高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

      3.  37℃恒溫箱

      4.  蒸餾水或去離子水

       

      試劑盒組成

       

      名稱

      96孔配置

      48孔配置

      備注

      微孔酶標板

      12×8

      12×4

      標準品

      0.3mL*6

      0.3mL*6

      樣本稀釋液

      6mL

      3mL

      檢測抗體-HRP

      10mL

      5mL

      20×洗滌緩沖液

      25mL

      15mL

      按說明書進行稀釋

      底物A

      6mL

      3mL

      底物B

      6mL

      3mL

      終止液

      6mL

      3mL

      封板膜

      2

      2

      說明書

      1

      1

      自封袋

      1

      1

      備注

      1.  標準品濃度依次為:4000、2000、1000、500、250、125 pg/mL

      2.  經過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。


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