蘋果酸脫氫酶（MDH）ELISA 測試盒

蘋果酸脫氫酶（MDH）ELISA 測試盒

本試劑盒可測動物血清、培養液等相關液體樣本中 MDH 活性

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一、實驗儀器：

試管、微量移液器、旋渦混勻器、37°C 恒溫水浴鍋，紫外分光光度計（340nm）

二、適用范圍：

本試劑盒可測動物血清、培養液等相關液體樣本中 MDH 活性三、測定意義：

MDH 與植物代謝的多條重要途徑有密切關系，它在運轉物質和能量的 Mal/OAA（蘋果酸/草酰乙酸）和 Mal/Asp（蘋果酸/天冬氨酸）穿梭中起重要作用；在光呼吸中，MDH 為 Gly（甘氨酸）氧化提供 NAD+；在線粒體中，MDH 還是決定 TCA(三羧酸循環)運轉速度的調節酶之一；在細胞溶質中， MDH 與丙酮酸支路相聯系。所以 MDH 系統不僅是研究酶區域化和酶調節的好系統，也為研究各細胞器之間的聯系和許多發育問題提供了方便。

四、操作步驟：

a、將紫外分光光度計于 340nm 處,0.5cm 光徑石英比色皿,以雙蒸水調零 (石英比色皿準備兩只,

一只用于調零,一只用于測定)。

b、將工作液，37℃預溫 3 分鐘以上。

c、往相應編號的試管中加入 50μl 待測樣本，取 1ml 工作液迅速沖入試管中，立即混勻并計時。

(空白管取 50μl 雙蒸水,加入 1ml 工作液,其它操作與測定相同)

d、迅速倒入石英比色皿中在紫外分光光度計 340nm處比色，20 秒時讀取吸光度值（A 1值）,在 1

分 20 秒時再次測定吸光度值（A2 值）；

e、求出 2 次吸光度差值（△A=A1 -A2 ）。

[注]：空白管只須做 1～2 只 (空白 OD 很穩定)

若△A 測定/分＜0.05 則需加大樣本的濃度；否則影響檢測結果。

若△A測定/分＞0.3，則需將樣本的濃度稀釋后再測；否則影響檢測結果。

請在批量檢測前一定要取正常對照組樣本做此樣本最佳濃度的預試。

五、計算公式：

MDH活力 =  測定 A－空白 A    × 反應液總體積(1.05ml) × 樣本測試前 ÷ 待測樣本蛋白濃度

（U / mgprot） 6.2*×比色光徑(0.5cm)    取樣量(0.05ml)         稀釋系數        （mgprot / ml）

* 6.2 ：底物的微摩爾消光系數

測定管△A：20 秒時測定管的吸光度 OD 減去 1 分 20 秒時的測定管吸光度 OD；

空白管△A：20 秒時空白管的吸光度 OD 減去 1 分 20 秒時的空白管吸光度 OD。